Anche senza sintomi, i booster di mRNA innescano immunosoppressione, infiammazione sistemica e anomalie della coagulazione
Il D-dimero (una misura della coagulazione) NON dovrebbe MAI aumentare dopo la vaccinazione. Ma questo studio sui giovani adulti appena pubblicato mostra che con i booster COVID, è raddoppiato in sole 48 ore dopo la vaccinazione.
Linfociti immunosoppressori: 2,34 → 1,91 ×10⁹/L (p < 0,0005)
IFN-γ: 54,7 → 46,1 ng/mL (p < 0,05) Infiammazione PCR: 6,1 → 14,8 mg/L (p < 0,0001) hs-PCR: 1,47 → 3,52 mg/L (p < 0,0001)
Attivazione della coagulazione
D-dimero: 0,20 → 0,47 mg/L (p < 0,005) PT e aPTT: entrambi ↑ (p < 0,05) Ciò mette in discussione la nozione di reazioni “lievi”, dimostrando che anche in assenza di sintomi evidenti, i booster di mRNA possono innescare interruzioni nascoste ma pericolose in immunità, infiammazione e coagulazione.
Risposte immunitarie ed ematologiche alla terza dose di un vaccino mRNA contro il COVID-19: uno studio longitudinale di sei mesi
Questo studio indaga le risposte biochimiche ed ematologiche alla terza dose di un vaccino a mRNA contro il COVID-19 in 68 partecipanti sani che avevano precedentemente ricevuto due dosi del vaccino.
I campioni di sangue sono stati raccolti al basale (prima della dose di vaccino; D0), 48 ore dopo la vaccinazione (D2) e successivamente ai giorni 30, 60, 120 e 180 (D30, D60, D120, D180). Lo studio si è concentrato sull’analisi delle variazioni delle immunoglobuline anti-SARS-COV-2 (IgG e IgA), dei biomarcatori infiammatori (IL-6, IFN-γ, PCR, hs-PCR), dei fattori della coagulazione (PT, APTT, D-dimeri) e della conta delle cellule del sangue (neutrofili, leucociti, piastrine) a D2 post-vaccinazione, e delle IgG e IgA ai giorni 2, 30, 60, 120 e 180 post-vaccinazione.
In questo studio, non sono stati osservati AEFI clinici in nessuno dei riceventi. Sono state osservate lievi variazioni nei livelli dei biomarcatori infiammatori e della coagulazione e delle cellule del sangue. I livelli di PCR e hs-PCR sono aumentati leggermente ma significativamente, i d-dimeri sono aumentati e PT e aPTT sono stati prolungati significativamente. È stata osservata una piccola ma significativa diminuzione dell’IFN-γ e della conta linfocitaria media, mentre non è stata osservata alcuna variazione nei livelli di IL-6, neutrofili e conta piastrinica a D2. I livelli di IgG e IgA hanno mostrato un aumento sostenuto nel periodo di sei mesi. Questi risultati dimostrano collettivamente che la terza dose del vaccino a mRNA provoca una risposta immunitaria rapida e sostenuta caratterizzata da livelli aumentati di IgG e IgA. Le variazioni osservate nei marcatori infiammatori e nei fattori della coagulazione dopo la vaccinazione, osservate poco dopo la vaccinazione, richiedono ulteriori indagini.
1 Introduzione
……. Omissis ……..
È stato dimostrato che questi vaccini inducono rapidamente risposte immunitarie innate e adattative. Queste risposte includono la produzione di anticorpi neutralizzanti e l’attivazione di cellule T CD4 e CD8 specifiche per l’antigene ( Gebre et al., 2021 ; Cagigi e Loré, 2021 ). La risposta immunitaria innata viene potenziata dopo la vaccinazione di richiamo, portando a una risposta immunitaria più potente ( Arunachalam et al., 2021 ).
La risposta immunitaria si manifesta a scapito di alterazioni nei profili infiammatori e di coagulazione. Si ritiene che queste alterazioni influenzino gli eventi avversi segnalati in seguito all’immunizzazione. Gli eventi avversi comunemente segnalati includono dolore, arrossamento, gonfiore nel sito di iniezione, affaticamento, mal di testa, dolori muscolari, brividi, febbre e nausea.
Questi sono generalmente di breve durata, non gravi e indicano la risposta immunitaria dell’organismo al vaccino.
Tuttavia, sono stati osservati eventi avversi gravi, tra cui reazioni allergiche, miocardite e pericardite, in particolare nei giovani uomini dopo la seconda dose ( Yasmin et al., 2023 ; Seyedalinaghi et al., 2022 ; Klein et al., 2021 ).
Sono stati segnalati anche eventi tromboembolici e sindrome di Guillain-Barré, ma la loro associazione con il vaccino è ben chiarita. Sebbene i meccanismi biologici alla base degli eventi avversi non siano stati ancora pienamente compresi, si ipotizza che siano strettamente correlati al profilo infiammatorio e ai cambiamenti del sistema di coagulazione che vanno oltre la loro normale soglia necessaria.
Questo studio mira a indagare le diverse risposte biochimiche ed ematologiche dopo la terza dose di vaccino mRNA contro il COVID-19, con particolare attenzione alla risposta immunitaria longitudinale.
Studiando le dinamiche delle immunoglobuline (IgG e IgA), dei biomarcatori infiammatori (IL-6, IFN-γ, PCR, hs-PCR), dei fattori della coagulazione (PT, APTT, D-dimero) e dei parametri ematologici (neutrofili, leucociti, piastrine), intendiamo scoprire nuove informazioni sui complessi meccanismi alla base dell’immunità indotta dal vaccino e aprire la strada a ulteriori ricerche volte a dimostrare l’interazione tra questi sistemi strettamente correlati. Questa ricerca mira a colmare lacune critiche nella conoscenza degli effetti a lungo termine della vaccinazione di richiamo, fornendo infine informazioni su strategie basate sull’evidenza per ottimizzare l’efficacia e la sicurezza del vaccino, in particolare nelle popolazioni ad alto rischio.
2 Materiali e metodi
2.1 Partecipanti allo studio
Questo studio è stato avviato dopo l’approvazione del comitato etico della Khyber Medical University di Peshawar (Lettera n.: DIR/KMU-EB/KC/000987/DR). Si è trattato di uno studio osservazionale longitudinale condotto presso la Khyber Medical University di Peshawar dal 15 aprile al 15 novembre 2022. Per arruolare i partecipanti, 68 individui sani di età compresa tra 20 e 30 anni, vaccinati con due dosi di un vaccino (la miscela di Cansino e Sinovac) almeno sei mesi prima e al massimo otto mesi prima, è stato utilizzato un metodo di campionamento non probabilistico, semplice e pratico. I partecipanti con infezione da COVID-19 da meno di sei mesi non sono stati inclusi, poiché il Governo ha raccomandato di non vaccinare prima che siano trascorsi più di sei mesi dall’infezione da COVID-19. Sono stati esclusi gli individui con una grave reazione allergica a una qualsiasi delle dosi precedenti, comorbilità gravi come obesità patologica, diabete, ipertensione, infezione da COVID-19 in corso e qualsiasi altra infezione, qualsiasi stress fisiologico come gravidanza, puerperio, immunodeficienza come AIDS, farmaci immunosoppressori e qualsiasi tipo di diatesi emorragica. La formula (n=z²x p(1−P)ⅇ²) è stata utilizzata per calcolare la dimensione del campione dove z (livello di confidenza) era del 75%, e (margine di errore) era del 7% e p (proporzione stimata della popolazione) era del 50%.
Sono stati rispettati i principi etici standard. I consensi informati dei partecipanti sono stati debitamente firmati prima della raccolta dei dati e dei campioni di sangue, ed erano liberi di abbandonare lo studio in qualsiasi momento durante il follow-up. Ai partecipanti sono stati forniti consulenza clinica e assistenza in caso di reazioni avverse successive alla vaccinazione.
2.2 Raccolta ed elaborazione dei campioni
Cinque ml di sangue sono stati raccolti prima della somministrazione del vaccino mRNA Pfizer/BioNTech (lotto n. 36310BA; data di scadenza: 08/2022; Pfizer Inc. New York, NY 10017, BioNTech Manufacturing GmbH, An der Goldgrube 1255131 Mainz, Germania) e 48 ore dopo la somministrazione tramite vacutainer. Il sangue è stato raccolto in provette con EDTA, provette con citrato trisodico e provette con gel. L’emocromo è stato eseguito dal sangue in provette con EDTA utilizzando un analizzatore ematologico in tre parti chiamato Sysmex XP-100 [utilizzando un pacchetto di cellule (AM2014/17-09-023) e uno stromatolizzatore (AM1026/15-11-022)] e poi scartato. Il sangue raccolto in provette con citrato trisodico e provette con gel è stato centrifugato a 4.500 giri al minuto per 5 minuti per estrarre rispettivamente plasma e siero. La separazione di plasma e siero è stata trasferita in contenitori per siero e conservata rispettivamente a 4–5 °C e -80 °C. I campioni sono stati scongelati secondo il protocollo standard prima dell’analisi. Il plasma è stato analizzato per PT e APTT con metodo manuale. Utilizzando Finecare FIA FS-112, il siero è stato analizzato per PCR e hs-CRP (kit di test Rif. n. W201, LOTTO n. F20115C0EAD) e D-dimeri (Rif. n. 211, LOTTO n. F2111560DAD). Il siero è stato inoltre analizzato per IL-6 e IFN-γ utilizzando il dispositivo ELISA BioTek (EL x800) e i kit di BT LAB (Catalogo n. E0090Hu, LOT. n. 202210011; Bioassay Technology Laboratory, Birmingham, Inghilterra) e (Catalogo n. E0105Hu, LOT. n. 202210011; Bioassay Technology Laboratory, Birmingham, Inghilterra). I campioni successivi, ovvero dal giorno 30 al giorno 180, sono stati raccolti solo in provette per gel e centrifugati a 4.500 rpm per 5 minuti. Il siero separato è stato raccolto in coppette per siero e conservato a -80 °C. Il siero di tutti i campioni è stato analizzato per IgG e IgA anti-SARS CoV2 anti-RBD tramite la macchina BioTek ELISA (EL x800) utilizzando il kit ELISA di FineTest (catalogo n. EH4943, lotto n. H4850H103; Wuhan Fine Biotech Co., LTD, Optics Valley Biomedical Industrial Park, Wuhan, Cina) e (catalogo n. EH4950, lotto n. H4950H106 J; Wuhan Fine Biotech Co., LTD, Optics Valley Biomedical Industrial Park, Wuhan, Cina), rispettivamente.
2.3 Immunoassay di fluorescenza
PCR, hs-CRP e D-dimeri sono stati analizzati utilizzando il dispositivo Finecare FIA FS-112, che utilizza un metodo di rilevazione immunologica a sandwich. 5 µl di siero per PCR e hs-CRP e 10 µl di plasma per D-dimeri sono stati trasferiti dai contenitori per siero alla provetta di rilevazione con una pipetta di trasferimento. Il coperchio del tampone di rilevazione è stato chiuso e agitato delicatamente dieci volte per miscelare accuratamente il campione. 75 µl di miscela di campione sono stati prelevati e caricati nel pozzetto della cartuccia di test, che è stata quindi inserita nel supporto della cartuccia del dispositivo FIA e quindi analizzata. I risultati sono stati visualizzati sulla schermata principale del sistema.
2.4 Immunoanalisi enzimatica indiretta
I kit di anticorpi quantitativi anti-SARS CoV-2 IgG e anti-SARS CoV-2 IgA hanno eseguito l’ELISA seguendo le linee guida del produttore. I reagenti sono stati portati a temperatura ambiente. Le piastre sono state lavate due volte prima di aggiungere lo standard, il campione (diluito 1/100 con tampone di soluzione campione) e il pozzetto di controllo (Blank). 50 µl di standard o campione sono stati aggiunti a ciascun pozzetto e incubati per 30 minuti a 37 °C. Le piastre sono state aspirate e lavate tre volte. 50 µl di soluzione di lavoro anticorpale marcata con HRP sono stati aggiunti a ciascun pozzetto e incubati per 30 minuti a 37 °C. Le piastre sono state nuovamente aspirate e lavate cinque volte. Sono stati aggiunti 50 µl di soluzione di substrato TMB e incubati per 15 minuti a 37 °C. Sono stati aggiunti 50 µl di soluzione di stop, quindi le piastre sono state inserite nel lettore di piastre e lette immediatamente a 450 nm.
I kit quantitativi per IFN-γ e IL-6 hanno eseguito l’ELISA seguendo le linee guida del produttore. I reagenti sono stati portati a temperatura ambiente. Le piastre sono state lavate due volte prima di aggiungere lo standard, il campione (diluito 1/20 con tampone di soluzione campione) e il pozzetto di controllo (bianco). 50 µl di standard sono stati aggiunti ai pozzetti standard e 40 µl di campione ai pozzetti campione. 10 µl di anticorpi anti-IFN-γ e anti-IL-6 sono stati aggiunti ai pozzetti campione, seguiti da 50 µl di streptavidina-HRP sia nei pozzetti campione che in quelli standard. La piastra è stata coperta con pellicola sigillante e incubata per 60 minuti a 37 °C. Le piastre sono state lavate cinque volte con tampone di lavaggio e 50 µl di soluzione di substrato A sono stati aggiunti a ciascun pozzetto, seguiti da 50 µl di soluzione di substrato B. Le piastre sono state quindi sigillate e incubate per 10 minuti a C. 50 µl di soluzione di stop sono stati aggiunti a tutti i pozzetti, cambiando il colore da blu a giallo. Le piastre sono state inserite nel lettore latente p37 °C entro 10 minuti e lette a 450 nm.
2.5 Analisi statistica
I dati dello studio sono stati esportati in un foglio di calcolo MS Excel e analizzati utilizzando GraphPad Prism (versione: 9.5.1, azienda: Dotmatics, paese: Stati Uniti). La media e la deviazione standard sono state calcolate per le variabili numeriche continue, mentre la frequenza e le percentuali sono state calcolate per le variabili categoriali discrete. È stato ottenuto un valore P per determinare la significatività statistica dei test.
3 risultati
In questo studio sono stati arruolati 68 individui di età compresa tra 20 e 30 anni. Tra i 68 partecipanti, il 41% (n=28) era di sesso maschile, mentre il 59% (n=40) era di sesso femminile. Non sono state effettuate differenze in base all’età o al sesso. Inoltre, il 28% (n=19) ha riferito di non aver contratto l’infezione sintomatica, mentre il 72% (n=49) ha riferito di aver sofferto di infezione sintomatica prima della terza dose di vaccino, confermata dalla PCR.
3.1 Livelli di anticorpi anti-SARS-CoV-2
I livelli di IgG e IgA anti-SARS-CoV-2 sono stati valutati in sei momenti tramite ELISA al giorno 0 (immediatamente prima della somministrazione del vaccino) e poi ai giorni 2, 30, 60, 120 e 180 dopo la somministrazione del vaccino.
I livelli di IgG sono aumentati progressivamente e costantemente a tutti i punti temporali di follow-up. Al giorno 0, il titolo anticorpale medio era di 6182,76 ± 1983,23 ng/mL, che è salito a un livello statisticamente molto significativo ( p = <0,0001) di 6646,62 ± 2089,03 ng/mL il giorno 2 (48 ore dopo la dose), Figura 1a Al giorno 30, il titolo medio era di 8802,67 ± 1569,19 ng/mL; al giorno 60, 9345,61 ± 1398,10 ng/mL. Al giorno 120, questi titoli sono saliti a 10193,53 ± 1228,14 ng/mL; al giorno 180, sono saliti a 10548,58 ± 1304,90 ng/mL. Gli aumenti in tutti questi punti temporali erano statisticamente significativi ( p = <0,0001), Figura 1aFigura 1
Figura 1. Grafici lineari che mostrano l’aumento graduale dei livelli anticorpali nell’arco di sei mesi. Test statistico: Kruskal-Wallis con test di Dunn post-hoc per confronti multipli a coppie. (a) . IgG media con deviazione standard nel siero nell’arco di sei mesi a sei punti temporali. (b) IgA media con deviazione standard nel siero nell’arco di sei mesi a sei punti temporali. ns (non significativo) = >0,9999, **0,0050, ****<0,0001.
Analogamente, i livelli sierici medi di IgA sono aumentati progressivamente. Al giorno 0, il titolo anticorpale medio era di 497,63 ± 277,73 ng/mL, che è aumentato a 489,08 ± 225,70 ng/mL dopo 48 ore. Questo aumento non era statisticamente significativo ( p = >0,9999) rispetto all’aumento dei livelli di IgG, Figura 1b Inoltre, di minore significatività statistica (p = 0,0050) è stato l’aumento al giorno 30, e i livelli di IgA erano 679,47 ± 278,62 ng/mL, Figura 1b Successivamente, l’aumento dei livelli di IgA è stato statisticamente significativo ( p = <0,0001). Il giorno 60, 120 e 180, i titoli medi erano rispettivamente 804,84 ± 332,63 ng/ml, 910,91 ± 349,72 ng/ml e 930,80 ± 333,11 ng/ml ( Figura 1b ).
3.2 Citochine infiammatorie
Questo studio ha analizzato IL-6 e IFN-γ mediante ELISA e PCR e hs-PCR mediante metodo FIA. Questi sono stati misurati due volte nei partecipanti, ovvero a D0 e D2. Il livello medio di IL-6 a D0 era di 92,64 ± 69,10 ng/L, che è sceso a 82,55 ± 74,90 ng/L a D2. Questa diminuzione dei livelli di IL-6 è stata statisticamente insignificante ( p = >0,05), come mostrato nella Tabella 1 .Tabella 1
Tabella 1. Livelli di citochine infiammatorie pre-vaccinazione (D0) e post-vaccinazione (D2) (test statistico: Mann Whittney).
La media di IFN-γ a D0 era di 54,70 ± 27,69 ng/mL, che è scesa a 46,08 ± 26,15 ng/mL a D2. È stata osservata una diminuzione di IFN-γ, come per IL-6, ma a differenza di IL-6, era statisticamente significativa ( p = <0,05), sebbene la significatività statistica non fosse così grande come osservato nella Tabella 1 .
I livelli medi di PCR erano 6,12 ± 4,42 a D0, che sono saliti a 14,84 ± 27,70 mg/L a D2. A differenza di IL-6 e IFN-γ, è stato osservato un aumento statisticamente significativo ( p = <0,0001) nei livelli di PCR ( Tabella 1 ). Analogamente, la PCR media hs a D0 era 1,47 ± 1,59 mg/L, che è aumentata a 3,52 ± 1,55 mg/L a D2. Analogamente alla PCR, è stato osservato un aumento significativo ( p = <0,0001) nei livelli di PCR hs a D2 ( Tabella 1 ).
3.3 Profilo di coagulazione
Per determinare il profilo coagulativo sono stati valutati D-dimeri, PT e APTT. I D-dimeri sono stati valutati utilizzando FIA, mentre PT e APPT sono stati analizzati con metodo manuale.
A D0, il livello medio di D-dimeri era di 0,20 ± 0,21 mg/L, che è aumentato a 0,47 ± 0,57 mg/L a D2. Questo aumento è stato statisticamente significativo ( p = <0,005), come mostrato nella Tabella 2 .Tabella 2
Tabella 2. Profilo di coagulazione pre-vaccinazione (D0) e post-vaccinazione (D2) (Test statistico: Mann Whittney).
Il tempo di protrombina medio a D0 era di 12,49 ± 2,09 secondi, che è aumentato leggermente a 13,51 ± 2,88 secondi a D2. L’aumento è stato statisticamente meno significativo ( p = <0,05) ( Tabella 2 ). Analogamente, l’APTT medio a D0 era di 33,02 ± 17,04 secondi, che è aumentato a 34,13 ± 14,11 secondi a D2. Come il PT, anche gli aumenti dell’APTT sono stati statisticamente meno significativi ( p = <0,05), come mostrato nella Tabella 2 .
3.4 Conteggio delle cellule
I conteggi delle cellule sono stati eseguiti in due momenti: D0 corrisponde al momento precedente alla dose di vaccino e D2 corrisponde al momento 48 ore dopo la dose di vaccino.
La conta media dei linfociti a D0 era 2,34 ± 0,81 x 10 3 /μL, che è diminuita a 1,91 ± 0,53 x 10 3 /μL a D2. Le diminuzioni nella conta dei linfociti erano statisticamente significative (p = <0,0005), come mostrato nella Tabella 3. La conta media dei neutrofili a D0 era 4,33 ± 1,06 x 10 3 /μL, che è diminuita a 4,05 ± 1,04 x 10 3 /μL a D2. A differenza della conta dei linfociti, questa diminuzione nella conta dei neutrofili non era statisticamente significativa ( p = >0,05) ( Tabella 3 ). La conta piastrinica media a D0 era di 246,25 ± 73,64 x 10 3 /μL, che è aumentata a 256,99 ± 76,20 x 10 3 /μL a D2. Come notato, a differenza delle conte dei linfociti e dei neutrofili, è stato osservato un aumento nella conta piastrinica, ma non era statisticamente significativo (p = >0,05), come presentato nella Tabella 3 .Tabella 3
Tabella 3. Conteggio delle cellule pre-vaccinazione (D0) e post-vaccinazione (D2) (x 103/μL) (Test statistico: t-test non accoppiato).
4 Discussione
Questo studio mira a valutare gli effetti della terza dose di un vaccino mRNA contro il COVID-19 sulla risposta anticorpale, sui biomarcatori infiammatori, sul profilo della coagulazione e sulla conta delle cellule del sangue. Questi erano le immunoglobuline, ovvero IgG e IgA anti-SARS-CoV-2; i biomarcatori dell’infiammazione, ovvero IL-6, IFN-γ, PCR e hsPCR; il profilo della coagulazione, ovvero D-dimeri, PT e APTT e la conta cellulare, ovvero linfociti, neutrofili e piastrine.
Sono stati arruolati un totale di 68 partecipanti sani che avevano ricevuto due dosi del vaccino contro il COVID-19 in precedenza, con una seconda dose sei mesi ma non più di otto mesi rispetto a questo studio.
Come dimostrano i risultati, i livelli di IgG e IgA anti-SARS sono aumentati dopo la somministrazione del vaccino a mRNA. Sebbene l’aumento dei livelli di IgG sia stato rapido, è stato osservato un aumento significativo anche 48 ore dopo la vaccinazione. I livelli di IgG e IgA non hanno raggiunto un plateau fino al giorno 180, ovvero sei mesi dopo la somministrazione del vaccino. Ciò conferma la protezione prolungata conferita dai vaccini a mRNA contro il COVID-19. Risultati simili sono riportati da Sabina Zurac et al., che hanno determinato i livelli di IgG e IgA al giorno 21 e al giorno 45 e hanno dimostrato che l’aumento medio di IgA era inferiore a quello di IgG dopo la seconda dose del vaccino a mRNA al giorno 21. Un altro studio di Herzberg et al., che ha indagato la risposta immunitaria alla terza dose di un vaccino a mRNA, ha indicato anch’esso un aumento significativo della risposta immunitaria dopo 4 settimane dalla terza dose ( Herzberg et al., 2022 ).
Tuttavia, contrariamente al nostro studio, hanno dimostrato che i livelli medi di IgA al giorno 45 erano superiori ai livelli di IgG, mentre nel nostro studio non è stato osservato alcun aumento dei livelli di IgA rispetto a IgG durante il periodo di studio ( Zurac et al., 2021 ). Poiché non disponiamo di dati sui livelli di IgG e IgA dei partecipanti dopo la seconda dose, non è possibile concludere se i livelli di immunoglobuline riportati prima della terza dose siano diminuiti o meno rispetto a quelli dopo la seconda dose. Alcuni studi in Europa e Giappone hanno dimostrato che i livelli di IgG erano scesi al 10% sei mesi dopo la seconda dose ( Naaber et al., 2021 ; Kato et al., 2022 ). Tuttavia, uno studio molto più ampio su oltre 18.000 operatori sanitari polacchi ha indicato che i vaccini a mRNA hanno fornito protezione fino a 8-9 mesi dopo la seconda dose ( Skorupa et al., 2022 ). Lo stesso studio ha dimostrato che con la terza dose , i livelli di IgG sono aumentati significativamente intorno al quinto giorno e hanno raggiunto il massimo il quattordicesimo giorno ( Skorupa et al., 2022 ). Nella nostra ricerca, come nello studio di Monika Skorupa et al. ( Skorupa et al., 2022 ), si è verificato un brusco aumento dei livelli di IgG, indicando che l’immunità conferita dalle due dosi precedenti ha una memoria significativa che si rafforza rapidamente in caso di qualsiasi futuro incontro con il virus o uno qualsiasi dei suoi componenti. Come mostrato dai risultati nella Figura 1a , è stato osservato un aumento costante per sei mesi e non è stato raggiunto alcun plateau fino a quel momento.
La risposta immunitaria è sempre preceduta e/o accompagnata da infiammazione, indipendentemente dal fatto che questa sia innescata da infezione o trasfezione. I marcatori infiammatori valutati nel nostro studio sono stati IL-6, IFN-γ, PCR e hs-PCR. Tutti questi sono reciprocamente inclusivi, poiché la PCR è un marcatore infiammatorio acuto prodotto dal fegato quando segnalato da IL-6. Entrambi valutano l’infiammazione di basso grado ( Del Giudice e Gangestad, 2018 ). Inoltre, si è ipotizzato che IFN-γ e IL-6 abbiano ruoli funzionalmente opposti nell’infiammazione, nella risposta immunitaria e nella proliferazione cellulare ( Qi et al., 2013 ). IFN-γ ha effetti pro-infiammatori, mentre quelli di IL-6 sono antinfiammatori ( Qi et al., 2013 ). Lo studio citato sopra di Herzberg et al. e un altro studio di Thomas et al. hanno riportato che IFN-γ aumenta significativamente dopo la dose di richiamo, suggerendo la risposta immunitaria delle cellule T. In uno studio di Herzberg et al., è stato riportato che il 96,3% dei partecipanti ha mostrato una risposta delle cellule T rilevabile, evidente dall’aumento di IFN-γ. Thomas et al. hanno approfondito la questione e hanno riferito che è stato mostrato un aumento significativo dell’IFN-γ insieme alla produzione di granzima B, anticorpi neutralizzanti e cellule B con cambio di classe ( Thomas et al., 2025 ). I protocolli di stratificazione e le tecniche sofisticate di entrambi questi studi conferiscono loro un valore aggiunto e i nostri risultati sono in accordo con gli aspetti relativi di questi studi. Nel nostro studio, è stato osservato un aumento della PCR 48 ore dopo la terza dose del vaccino, Tabella 1. Anche un’indagine di Ugur Sahin ha riportato gli stessi risultati e ha rilevato che i livelli di PCR sono scesi alla normalità l’ottavo giorno dopo la vaccinazione ( Sahin et al., 2020 ). Anche la PCR-hs è aumentata con significatività statistica ( p = <0,0001) nel nostro studio 48 ore dopo la dose del vaccino. Per diverso tempo, l’hs-CRP è stata considerata un marcatore indipendente di rischio cardiovascolare ( Moutachakkir et al., 2017 ). In linea con ciò, diversi studi hanno concluso, sulla base dei dati pubblicati, che può esistere una possibile associazione tra la vaccinazione contro il COVID-19 e gli eventi cardiaci, marcatamente visibili in popolazioni maschili giovani e altrimenti sane e con dosi ripetute di vaccini a mRNA ( Fatima et al., 2023 ). Sebbene sia possibile stabilire un’associazione temporale tra l’iniezione del vaccino e lo sviluppo di miocardite, la natura più lieve degli eventi avversi, il basso tasso di incidenza e la mancanza di studi sperimentali rendono difficile ipotizzare un’associazione causa-effetto.
L’infezione da COVID-19 è stata associata a disturbi nei percorsi della coagulazione. Il profilo di coagulazione alterato espresso da PT, APTT e D-dimeri è stato un indicatore significativo della gravità della malattia e viene utilizzato per orientare i piani di trattamento ( Mucha et al., 2020 ). La proteina S è stata indicata come il principale antigene antigenico e infiammatorio del virus. Poiché i vaccini a mRNA contengono la proteina S o subunità della proteina S, la presenza prolungata dell’antigene e l’eccessiva risposta immunitaria possono innescare un’infiammazione sostenuta che può danneggiare l’endotelio, alterando così le proprietà antitrombogeniche in diversi distretti vascolari ( Trougakos et al., 2022 ). Studi hanno mostrato notevoli alterazioni nei profili di coagulazione dopo la vaccinazione. Una revisione narrativa di Emmanuel J. Favaloro ha dimostrato che nella maggior parte degli studi inclusi nella revisione, i D-dimeri nei pazienti con diagnosi di sospetta trombocitopenia trombotica indotta dal vaccino COVID-19 erano quasi sempre anormali ( Favaloro, 2021 ). Nella nostra ricerca, come nelle osservazioni di Favaloro, è stato riportato un aumento statisticamente significativo nei livelli di D-dimero ( Tabella 2 ). Il nostro studio ha rilevato un aumento di minore significatività statistica nel PT e nell’APTT. Lo studio già menzionato da Favaloro ha anche sottolineato che nella maggior parte dei casi con trombocitopenia trombotica indotta da COVID-19, anche PT e APTT erano alterati ( Favaloro, 2021 ). Un altro studio su Nature di Jiping Liu et al. ha riportato che il vaccino a mRNA altera significativamente il profilo della coagulazione ( Liu et al., 2021 ). Hanno scoperto che il PT si è ridotto il 7° giorno dopo la somministrazione del vaccino, ma nei giorni 28 e 42, sia il PT che l’APTT si sono allungati. Hanno seguito i pazienti e hanno riferito che il profilo della coagulazione è tornato alla normalità al 90° giorno. Queste variazioni del profilo della coagulazione per un periodo significativamente più lungo suggeriscono che, per quanto clinicamente meno significative possano sembrare, queste variazioni dovrebbero essere valutate con grande attenzione, soprattutto in caso di dosi ripetute e pazienti a rischio di diatesi emorragica.
Un altro aspetto importante correlato ai profili infiammatori, immunologici e di coagulazione riguarda le cellule del sangue, in quanto svolgono un ruolo essenziale nell’infiammazione, nella risposta immunitaria e nell’interazione tra i vari attori coinvolti nel processo, nel linguaggio delle citochine e delle interleuchine e nel profilo di coagulazione. Il nostro studio si è concentrato sulle variazioni della conta dei neutrofili, dei linfociti e delle piastrine. È stata osservata una diminuzione statisticamente significativa della conta dei linfociti 48 ore dopo la dose di vaccino ( Tabella 3 ). Uno studio di Ugur Sahin et al. ha anche riportato una diminuzione di un andamento simile nei linfociti il secondo giorno dopo la dose di vaccino, che è tornata alla normalità l’ottavo giorno ( Sahin et al., 2020 ). Lo stesso studio, d’altra parte, aveva riportato un aumento della conta dei neutrofili il secondo giorno, tornata alla normalità l’ottavo giorno dopo la dose di vaccino ( Sahin et al., 2020 ).
Contrariamente ai risultati di Ugur Sahin et al., in questo studio è stata osservata una diminuzione della conta dei neutrofili il secondo giorno dopo la dose di vaccino, ma ciò non era statisticamente significativo ( Tabella 3 ). Il nostro studio ha riportato un aumento statisticamente insignificante della conta piastrinica il secondo giorno dopo la dose di vaccino. Sebbene non statisticamente significativo, l’aumento della conta piastrinica contrastava con l’osservazione generale di una diminuzione dopo la vaccinazione contro il COVID-19. Tuttavia, sono stati segnalati rari casi in cui i pazienti presentavano trombocitosi dopo la vaccinazione contro il COVID-19, ma quei vaccini erano a base di adenovirali ( Graça et al., 2021 ).
È essenziale riconoscere i limiti di questo studio. In primo luogo, la dimensione del campione era ridotta. La ridotta dimensione del campione influisce sulla generalizzabilità di questi risultati a segmenti più ampi di popolazione con background etnici, geografici e genetici diversi. In secondo luogo, non sono stati inclusi bambini e pazienti anziani. Inoltre, non sono stati arruolati pazienti con immunodeficienze, comorbilità, anomalie della coagulazione e malattie infiammatorie, e i risultati non possono essere applicati a loro. In terzo luogo, lo studio non ha potuto valutare i livelli di IgG e IgA dopo sei mesi dalla dose di vaccino. Analogamente, le variazioni delle citochine infiammatorie e del profilo della coagulazione non sono state monitorate entro 48 ore dalla dose di richiamo, e lo studio non può far luce su ciò che avrebbe potuto essere osservato dopo questo periodo di tempo specificato.
Sono necessarie ulteriori ricerche per affrontare queste limitazioni e comprendere meglio la cinetica degli anticorpi, i cambiamenti nei marcatori infiammatori, i profili di coagulazione e i componenti cellulari del sangue, nonché l’interazione di questi meccanismi correlati.
5 Conclusioni
Una dose di richiamo con un vaccino a mRNA al momento raccomandato provoca un rapido aumento dei livelli di IgG e IgA anti-SARS-CoV-2 per almeno sei mesi. L’aumento delle citochine infiammatorie e le alterazioni del profilo della coagulazione sono coerenti con il normale meccanismo di induzione immunitaria del vaccino. Lievi AEFI sono state segnalate in una minoranza di soggetti vaccinati. Le costanti alterazioni subcliniche nei marcatori infiammatori e della coagulazione suggeriscono che questi percorsi potrebbero essere coinvolti nella patogenesi delle ARFI gravi segnalate con i vaccini a mRNA.
Dichiarazione di disponibilità dei dati
I dati grezzi a supporto delle conclusioni del presente articolo saranno resi disponibili dagli autori, senza indebite riserve.
Dichiarazione etica
Gli studi condotti su esseri umani sono stati approvati dal comitato etico della Khyber Medical University di Peshawar (Lettera n.: DIR/KMU-EB/KC/000987/DR). Gli studi sono stati condotti in conformità con la legislazione locale e i requisiti istituzionali. I partecipanti hanno fornito il loro consenso informato scritto per partecipare a questo studio.
Contributi degli autori
WB: Acquisizione finanziamenti, Risorse, Concettualizzazione, Metodologia, Scrittura – bozza originale, Software. AA: Metodologia, Scrittura – bozza originale, Cura dei dati, Software, Visualizzazione, Indagine, Validazione, Acquisizione finanziamenti, Amministrazione del progetto, Analisi formale. MM: Indagine, Validazione, Cura dei dati, Scrittura – bozza originale, Analisi formale, Software. HN: Validazione, Scrittura – bozza originale. TA: Cura dei dati, Visualizzazione, Scrittura – revisione e modifica. MB: Scrittura – bozza originale, Visualizzazione. MH: Scrittura – bozza originale, Visualizzazione. NC: Scrittura – bozza originale, Visualizzazione, Validazione. SH: Amministrazione del progetto, Supervisione, Scrittura – revisione e modifica, Concettualizzazione, Acquisizione finanziamenti. YY: Amministrazione del progetto, Analisi formale, Concettualizzazione, Metodologia, Visualizzazione, Scrittura – revisione e modifica, Acquisizione finanziamenti, Supervisione, Indagine.
Finanziamento
L’autore/gli autori dichiarano di aver ricevuto supporto finanziario per la ricerca e/o la pubblicazione di questo articolo. Il progetto è stato finanziato dal Deanship of Scientific Research (DSR) della King Abdulaziz University di Jeddah, con sovvenzione n. G-624-142-38.
Ringraziamenti
Esprimiamo la nostra profonda gratitudine al Preside della Ricerca Scientifica (DSR) della King Abdulaziz University di Jeddah per il suo prezioso supporto finanziario (con sovvenzione n. G-624-142-38).
Conflitto di interessi
Gli autori dichiarano che la ricerca è stata condotta senza alcuna relazione commerciale o finanziaria che potrebbe potenzialmente creare un conflitto di interessi.
Dichiarazione di intelligenza artificiale generativa
L’autore/gli autori dichiarano che nella creazione di questo manoscritto non è stata utilizzata alcuna intelligenza artificiale generativa.
Nota dell’editore
Tutte le affermazioni espresse in questo articolo sono esclusivamente quelle degli autori e non rappresentano necessariamente quelle delle loro organizzazioni affiliate, né quelle dell’editore, dei redattori e dei revisori. Qualsiasi prodotto che possa essere valutato in questo articolo, o qualsiasi affermazione che possa essere fatta dal suo produttore, non è garantito o approvato dall’editore.
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Parole chiave: AEFI, profilo di coagulazione, emocromo completo, IgA, IgG, citochine infiammatorie, vaccino mRNA COVID-19
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Ricevuto: 20 aprile 2025; Accettato: 23 giugno 2025;
Pubblicato: 10 luglio 2025.
A cura di:Oleksandr Kamyshnyi , Università medica statale di Ternopil, Ucraina
Recensito da:Waleed Rasheed , Università Politecnica di Duhok, Iraq
Iva Ivanko , Ospedale delle Suore della Carità, Croazia
